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HIV检测技术

时间:2019-02-10 12:14 来源:艾滋病检测试纸 作者:HIV试纸 点击:

酶联免疫吸附试验(ELISA),明胶颗粒凝集测试(PA),斑点印迹(色谱或渗滤)测试(目前的国内金标准测试)和免疫荧光测试(IFA)。确认试验主要通过Western印迹(WB),HIV的其他快速筛选试验(RST)等进行。

HIV检测技术抗体检测分类:目前使用的主要筛选方法有,酶联免疫吸附试验(ELISA),明胶颗粒凝集测试(PA),斑点印迹(色谱或渗滤)测试(目前的国内金标准测试)和免疫荧光测试(IFA)。确认试验主要通过Western印迹(WB),HIV的其他快速筛选试验(RST)等进行。

HIV检测技术

1、ELISA:用于检测抗HIV的ELISA方法是血液筛查中常用的最早和发展最快的国际上使用的检测技术。为了确保输血的安全性,试剂的灵敏度不断提高,窗口期明显缩短,大大降低了输血的风险。

通过输血传播艾滋病毒的风险已从20世纪80年代的高水平下降到近年来的不到1/440 000~1 / 600000。 1985年,美国开发的第一代试剂(使用病毒裂解抗原涂层的ELISA间接方法)虽然灵敏度和特异性低,但在预防HIV输血方面发挥了先锋作用。为了避免由细胞培养蛋白引起的非特异性反应,在1990年,使用基因重组和肽形成抗原开发了第二代试剂。

次年,开发了第三代抗生素夹心法试剂具有大于99%的灵敏度和> 95%的特异性。第三代试剂不仅检测抗HIV IgG,还检测早发IgM抗体,并于1996年改进为含有“O”亚型的第三代试剂。 1998年,第四代试剂出现在世界各地。它还可以在检测抗HIV时检测p24抗原。它被称为HIV抗原/抗体试剂。目前有三代主要试剂,Vironostika HIV II抗原/抗体Combi(Boehringer)和HIV DUO(Biomerieux)。

在我国注册的第四代试剂是荷兰生产的Vironostika HIVII抗原/抗体。其抗原成分是gp160 / gp36 / NAT70,也包被单克隆抗p24抗体。由于试剂的不断改进,“窗口期”逐渐缩短,第一窗口试剂“窗口期”约为3个月,第二代比第一代短20天,第三代比第二代短4至9天[2],第四代是第四代平均缩短了4~7d。中国国内的ELISA试剂起步较晚,近年来发展迅速。许多制造商已开发出第三代试剂。

2、明胶颗粒凝集试验(PA):PA是一种快速HIV抗检测方法。首先稀释样品,然后分别加入抗原致敏和非致敏明胶颗粒,混合并保湿(通常是室温)。由于操作简便,无需特殊设备,适用于少量试样的检测。当HIV抗体存在于血清中时,根据明胶颗粒,抗原致敏的明胶颗粒与抗体反应以产生抗原 - 抗体。解释了井中凝集的结果。对HIV-1和HIV-2抗原敏感的PA试剂(AFD HIV 1/2 PA)和由HIV-1和HIV-2抗原致敏的PA试剂(AERODLA-HIV-1/2)发达。目前可用于HIV 1/2筛查,后者可用于区分HIV-1和HIV-2。

3、斑点印迹(或免疫层析/或渗滤)试验:通常,硝酸纤维素膜用作固相载体,载体下的吸水垫可吸收添加的液体。将重组或多肽抗原包被在载体中,加入待测血清,将包被的抗原和测试血清中的抗体组合,并使用胶体金(或胶体硒)代替待附着的基质对于葡萄球菌蛋白A,金标记的蛋白A具有结合人Ig的能力,因此与捕获的HIV抗体结合。

如果样品结果为3~10min,则特异性较好,灵敏度相当于中等敏感ELISA。它适用于偏远农村地区的紧急使用和临床血液检测,但不适合在城市地区进行献血者检查。

免疫荧光试验(IFA):将HIV感染的淋巴细胞应用于载玻片并固定测试抗原芯片,待测血清中的抗HIV抗体与抗原结合,然后与荧光素标记的抗人Ig结合,观察绿色荧光细胞和多核巨细胞(细胞质荧光)在荧光显微镜下。 )。目前,中国只有少数条件和实验室。

HIV检测技术抗原检测:抗原检测适用于以下情况:(1)HIV-1抗体不确定性或窗口辅助诊断; (2)HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿的早期鉴别诊断; (3)四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂阳性,但HIV-1抗体证实为阴性; (4)监测疾病进展和抗病毒治疗效果
核酸检测:HIV核酸检测有两种类型,定性和定量。前者用于HIV感染的辅助诊断,后者常用于监测疾病的进展和HIV感染患者的抗病毒治疗效果。定性检测通常基于扩增产物的电泳图像。

阳性结果也可通过核酸序列测定确定:(1)HIV核酸检测为阴性,只能报告该实验的阴性结果,不能排除HIV感染; (2)HIV核酸检测阳性,可作为HIV感染诊断的辅助指标,不用于单独诊断HIV感染; (3)报告核酸的定性检测结果应说明反应条件和所用的引物序列。

定量检测:(1)根据仪器读数报告的结果,应标明检测方法,样品类型和样品量; (2)当测量结果小于最小检测限时,应指示最小检测限值水平。请注意,低于最低检测限的结果不能排除HIV感染; (3)应附上仪器打印的数据。

HIV检测技术艾滋病检测试剂的产生仅用于酶联试剂。除酶联检测试剂外,免疫层析快速诊断试剂常用于世界各地和中国的医院,灵敏度高,操作简单,检测可靠,检测结果短暂等,且我们提供给受害者的试纸是经过自我测试的。快速诊断试剂不分为三代酶联检测试剂。进口产品的检测时间甚至接近第四代酶联试剂的检测时间。检测范围与酶联检测试剂相同。可以添加HIV1和HIV2抗体的检测。

第一代试剂

1985年3月,美国食品和药物管理局批准了第一种HIV抗体筛选试剂,并将其应用于第一代HIV诊断试剂献血者的筛查。第一代HIV诊断试剂基于间接ELISA。包被的抗原是体外培养的HIV裂解物。该病毒裂解物不仅含有许多异种抗原,还含有主要的HIV结构和表达的蛋白质浓度。并且天然结构和表达的蛋白质含有许多交叉表位表位。因此,敏感性和特异性不高,并且出现许多假阴性和假阳性。尽管如此,第一代艾滋病毒诊断的出现仍然是一个划时代的变化,有效地阻止了艾滋病毒通过血液传播。

第二代试剂

随着基因工程技术的迅速发展,1990年5月采用基因重组或合成肽抗原的第二代HIV诊断试剂进行了访谈。虽然仍使用间接酶联免疫吸附试验原理,但第二代诊断试剂窗口与第一代诊断试剂相比,周期缩短约20天,灵敏度和特异性也得到改善。同时,由于第一代试剂仅含有HIV-1抗原,并且HIV-1抗原和HIV-2抗原的核苷酸序列相差40%,因此HIV-1抗体检测试剂对HIV的敏感性-2抗体阳性标本较高。为了应对这种情况,HIV-1 / HIV-2抗体诊断试剂盒出现在第二代诊断试剂中,其中将HIV-2抗原添加到包被的抗原(gp36)中。该多肽允许在一次试验中同时检测HIV-1和HIV-2抗体,从而节省时间,劳动力和成本。与第一代相比,第二代试剂显示出特异性的显着增加。

第三代试剂

第三代HIV诊断试剂出现于1994年。间接检测的原理发生了变化。通过双抗原夹心法检测标本中的抗体。酶标记也从抗人IgG抗体(即二抗)变为特异性HIV抗原。 。此外,在非洲喀麦隆发现HIV-1O群体后,研究人员发现HIV-1 O组样本在用HIV-1 / HIV-2抗体试剂进行检测时常常是假阴性。因此,将HIV-10O组抗原加入试剂中。 (gp41多肽)。因此,第三代试剂的灵敏度增加,并且窗口期进一步变窄。它是国际公认的抗体检测模型,目前是国际和国内市场的主流产品,通常被视为黄金标准。目前,中国国内第三代HIV诊断试剂盒在敏感性和特异性方面已达到国际先进水平。

第四代试剂

第四代HIV诊断试剂是HIV-1 / HIV-2抗体和HIV-1O亚组抗体和p24抗原的组合检测方法。该试剂消除了p24抗体的检测并增加了p24抗原的检测,并且不影响HIV抗体的检测。在第四代试剂的研究中,发现在血清转化期间p24抗原滴度降低并且S / CO值没有降低,并且第四代试剂的样品没有阴性且第三代试剂是阳性的。由于同时检测抗原和抗体以及HIV感染的不完善筛选试剂,建议使用第四代试剂筛查献血者,以最大限度地提高输血安全性。

随着科技医学水平的不断发展提高,人类对艾滋病的攻克程度越来越强,相信HIV检测技术会有更大的突破而应用于hiv防治上,为感染者的健康做出更为及时准确的判断。

(本文“HIV检测技术”的所属分类:爱卫试纸、雅培试纸、艾博试纸、SD试纸(4代)-艾滋病检测试纸)


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